蛋白免疫印迹（WB）样本准备要求

蛋白免疫印迹（WB）样本准备要求

蛋白免疫印迹（Western Blot）是将组织或细胞总蛋白质经电泳分离后转移到NC膜或PVDF膜上，然后利用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白检测技术，已广泛应用于蛋白表达检测、抗体活性检测及疾病早期诊断等多个领域。

样本准备要求：

组织样本：组织1cm×1cm×1cm大小，冰上取材，用生理盐水洗净去除和污物，并剔除非研究所需的组织，放入已标记的冻存管中，液氮速冻后，转运至-80℃冰箱保存，干冰运输。

细胞样本：培养好的细胞用细胞刮刮下或胰酶消化，离心收集细胞团，细胞团要求1×107 如米粒或黄豆大小，液氮速冻后放入-80 ℃冰箱中保存，干冰运输。

全血样本:肝素钠（绿头）或EDTA（紫头）抗凝管采集全血1ml，上下颠倒几次使血液与抗凝剂充分混匀，1h之内进行白细胞提取，细胞团要求 1×107 如米粒或黄豆大小，液氮速冻后放入-80 ℃冰箱中保存，干冰运输。

蛋白提取液：总蛋白浓度（细胞不低于3μg/μl，组织不低于5μg/μl）。

注意：提取后的蛋白建议经过浓度测定，再进行变性，变性时先加入Sample buffer，再95℃ 水浴10min，缓慢恢复至室温后离心。变性的蛋白可直接超低温保存（-80℃冰箱保存或干冰运输）。