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蛋白免疫印迹(WB)样本准备要求

更新时间:2024-03-20      浏览次数:131

蛋白免疫印迹(WB)样本准备要求


蛋白免疫印迹(Western Blot)是将组织或细胞总蛋白质经电泳分离后转移到NC膜或PVDF膜上,然后利用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白检测技术,已广泛应用于蛋白表达检测、抗体活性检测及疾病早期诊断等多个领域。


样本准备要求:

组织样本:组织1cm×1cm×1cm大小,冰上取材,用生理盐水洗净去除和污物,并剔除非研究所需的组织,放入已标记的冻存管中,液氮速冻后,转运至-80℃冰箱保存,干冰运输。

细胞样本:培养好的细胞用细胞刮刮下或胰酶消化,离心收集细胞团,细胞团要求1×107 如米粒或黄豆大小,液氮速冻后放入-80 ℃冰箱中保存,干冰运输。

全血样本:肝素钠(绿头)或EDTA(紫头)抗凝管采集全血1ml,上下颠倒几次使血液与抗凝剂充分混匀,1h之内进行白细胞提取,细胞团要求 1×107 如米粒或黄豆大小,液氮速冻后放入-80 ℃冰箱中保存,干冰运输。

蛋白提取液:总蛋白浓度(细胞不低于3μg/μl,组织不低于5μg/μl)。

注意:提取后的蛋白建议经过浓度测定,再进行变性,变性时先加入Sample buffer,再95℃ 水浴10min,缓慢恢复至室温后离心。变性的蛋白可直接超低温保存(-80℃冰箱保存或干冰运输)。



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