二抗选择具体过程

二抗选择具体过程

1.     针对一抗的宿主来源选择：二抗指向一抗的物种

2.针对一抗的类别亚型的选择： 二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

3.二抗的种属来源：除双标实验以外，一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。

4.二抗的耦联标记：针对不同的实验方法选择不同的标记，一般来讲，耦联到二抗上的探针主要有酶(辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP)，荧光基团(FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等)、生物素、金颗粒。一般做WB、 ELISA、 IHC等实验都是推荐HRP标记的二抗，做IF FC等都是FITC标记的抗体。

5.预吸附二抗的选择：对于于富含免疫球蛋白的组织和细胞，通常推荐使用预吸附血清的二抗于蛋白质印迹应用。预吸附的二抗与内源免疫球蛋白发生相互作用的可能性较低，因此可降低非特异性背景

6.特殊要求： F(ab’)2片段形式的二抗可避免与Protein A /G或与Fc受体的结合，其分子本身比较小，更容易渗透入细胞组织结构内而灵敏度更高 。Fab片段形式的二抗是只含有一个结合位点，可用来封闭内源性的免疫球蛋白；一般无要求的都是指抗IgG H&L，这类抗体和IgG分子的重链和轻链都可以反应，也可以和其他的免疫球蛋白家族（IgM，IgA，IgD,IgE）和亚家族反应，因为所有的免疫球蛋白都有相同的轻链.