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猪肿瘤蛋白P53(TP53) ELISA 试剂盒

  • 产品型号:
  • 更新时间:2024-02-04

简要描述:猪肿瘤蛋白P53(TP53) ELISA 试剂盒
质量稳定,准确性高。笃玛生物全程提供技术指导,确保您实验结果的准确性还提供免费代测服务。您只需提供代测样本,七个工作日内即可为您提供代测数据。欢迎前来咨询,订购。

产品详情

猪肿瘤蛋白P53(TP53) ELISA 试剂盒


仅供体外研究使用,不用于临床诊断!

产品规格:96T/48T(可拆)

产品数量:咨询

产品应用:ELISA实验

产品货期:现货

有效期:6个月

保存条件:2-8℃


猪肿瘤蛋白P53(TP53) ELISA 试剂盒

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实验原理

酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种基于抗原抗体反应的免疫学检测方法。其基本原理是利用抗原抗体的特异性结合,通过酶对底物反应的显色反应,对样本中的待测物质进行定量或定性分析。ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、适用范围广等特点,因此在生物医学研究、临床诊断和食品安全检测等领域得到了广泛应用。


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样品收集、处理及保存方法

1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

3. 细胞上清液:3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。


 

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标本的稀释原则:

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。计算浓度时,稀释了“N"倍,标本的浓度应再乘以“N"。 

标准品的稀释原则:

2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为300 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 

生物su标记抗体的稀释原则:

临用前以生物su标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su标记抗体加990μl生物su标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:

临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。


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实验步骤

1. 抗原包被:将抗原溶液加入到酶标板孔中,包被抗原,使其在孔底形成一层薄膜。

2. 清洗:清洗酶标板,去除未结合的抗原和其他杂质。

3. 阻断:加入阻断液,封闭酶标板孔中的非特异性结合位点,以减少非特异性结合。

4. 清洗:清洗酶标板,去除未结合的阻断液和其他杂质。

5. 加样:加入待测样本,使其与抗原发生特异性结合。

6. 清洗:清洗酶标板,去除未结合的样本和其他杂质。

7. 加酶标抗体:加入酶标记的抗体,使其与特异性结合的样本中的待测物质发生反应。

8. 清洗:清洗酶标板,去除未结合的酶标抗体和其他杂质。

9. 显色反应:加入底物溶液,发生酶催化反应,产生有色产物。

10. 终止反应:加入终止液,停止酶催化反应。

11. 检测:用酶标仪测定各孔的光密度值,记录数据。


ELISA试剂盒实验数据的计算处理方法

1、拟和曲线:

输入第一行: 浓度值, 如0 10 50 100 400

输入第二行:该浓度下的调整后的od值,如0 0.586 1.397 1.997 3.42

选择这些输入的数据,用插入里的图表按钮,进入图表向导,在“标准类型"中选择“xy散点图";在“子图表类型"中选择“折线散点图",按“下一步";选择“系列产生在行",按“下一步";数据标志,可以填写:如数据y轴,OD值;数据x轴,浓度;按下一步,点击完成。可得曲线图。

单击曲线,按右键,选择“添加趋势线",在类型中,选择多项式;在选项中,选择显示公式,选择显示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面说的方法: 双击图表,把它输入到图表的数据中,就可以拟和曲线。

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2、计算浓度:

第一次实验:

标准曲线为:

y = -4E-05x2 + 0.026x

R2 = 0.9745

为例,已知OD值,计算浓度。

由于y = -4E-05x2 + 0.026x,可以得到:

4E-05x2 -0.026x +y=0

ax2 +bx +y=0


注意事项

1. 实验前请仔细阅读本试剂盒的使用说明,确保所有材料、器具和试剂准备齐全。

2. 为保证实验结果的准确性,请务必遵循实验步骤进行操作,并注意控制实验条件的一致性。

3. 实验过程中请勿触摸酶标板上的酶标抗体区域,以免影响实验结果。

4. 实验结束后请及时清洗并整理实验器具,避免交叉污染。

5. 本试剂盒仅供体外诊断使用,使用前请仔细阅读说明书,如有疑问请及时联系厂家或专业技术人员。


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结果判断

 绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。


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什么时候进行ELISA测试时需要准备一系列稀释样本?

1)未知样本浓度:当你不知道样本中抗原或抗体的浓度时,准备一系列稀释样

可以帮助确保至少有一些稀释度落在ELISA的线性检测范围内。

2)避免信号饱和:对于浓度较高的样本,稀释可以防止信号饱和,即吸光度值超

出光度计的最大读数,从而保证结果的线性和准确性。

3)减少高剂量挂钩效应:在某些情况下,过高的抗原浓度会导致检测抗体无法形

成“夹心"结构,反而降低了检测信号,这称为“挂钩效应"。稀释样本可以避免这一

现象。

4)优化检测条件:为了找到最佳的检测条件和稀释度,初步实验通常会涵盖广泛

的稀释范围,以便后续实验可以直接使用最佳稀释度。

5)建立标准曲线:对于定量ELISA,需要使用一系列已知浓度的标准品来建立标准

曲线,未知样本的结果将与此曲线比较以确定其浓度。

6)控制非特异性结合:稀释样本可以减少非特异性结合,这种结合可能在高浓度

样本中更为常见。

7)实验重复性和可比性:为了确保实验的重复性和可比性,对于不同时间点或不

同实验条件下的样本,通常需要准备相同的稀释系列。

8)特殊样本类型处理:某些样本类型(如血清、血浆或含有抑制剂的样本)可能

需要稀释以减少背景干扰或抑制剂的影响。


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