相关文章ARTICLES

致力于成为更好的解决方案供应商!

产品中心/ PRODUCTS

我的位置:首页  >  产品中心  >  ELISA试剂盒  >  犬ELISA试剂盒  >  96T/48T犬端补体复合物C5b-9ELISA试剂盒

犬端补体复合物C5b-9ELISA试剂盒

  • 产品型号:96T/48T
  • 更新时间:2024-06-11

简要描述:犬端补体复合物C5b-9ELISA试剂盒,质量稳定,准确性高。笃玛生物全程提供技术指导,确保您实验结果的准确性还提供免费代测服务。您只需提供代测样本,七个工作日内即可为您提供代测数据。欢迎前来咨询,订购

产品详情

犬端补体复合物C5b-9ELISA试剂盒

种属:人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。
 
标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

1)血清:

室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

2)血浆:

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

3)尿液:

用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4)细胞培养上清:

A、检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。

B、检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5)组织标本:

切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。酶联免疫检测试剂盒用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

试剂盒组成及试剂配制

1.酶联板:一块(96孔)

2.标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为1,600 pg/ml,将其稀释为400 pg/ml后,再做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别稀释成400 pg/ml,200 pg/ml,100 pg/ml,50 pg/ml,25 pg/ml,12.5 pg/ml,6.25 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。如配制200 pg/ml标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 400 pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

3.样品稀释液:1×20ml。

4.检测稀释液A:1×10ml。

5.检测稀释液B:1×10ml。

6.检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。

7.检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。

8.底物溶液:1×10ml/瓶。

9.浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

11.覆膜:5张

12.使用说明书:1份

自备物品

1.酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)

2.微量加液器及吸头,EP管

3.蒸馏水或去离子水,全新滤纸

标本的采集及保存

1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3.其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

4.样本处理:血清或血浆标本推荐稀释5,000倍。

注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

犬端补体复合物C5b-9ELISA试剂盒

操作步骤

犬端补体复合物C5b-9ELISA试剂盒


实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。

注:

1.试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。

2.加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,*个孔与zui后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的 “预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。

3.孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

4.洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响zui后的酶标仪读数。

5.试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请精确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

6.反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

7.底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。

建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。

如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数。

洗板方法

1.手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。

2.自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

 计算

以标准物的浓度为纵坐标(对数坐标),OD值为横坐标(对数坐标),在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析,如curve expert 1.3,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。




在线咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
版权所有©2024 上海笃玛生物科技有限公司 All Rights Reserved   备案号:沪ICP备15023134号-2   sitemap.xml
技术支持:化工仪器网   管理登陆

网站二维码

TEL:15214367449

扫码添加微信