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绵羊表皮结合蛋白5(FABP5) ELISA 试剂盒

  • 产品型号:96T/48T
  • 更新时间:2024-04-03

简要描述:绵羊表皮结合蛋白5(FABP5) ELISA 试剂盒:质量稳定,准确性高。笃玛生物全程提供技术指导,确保您实验结果的准确性还提供免费代测服务。您只需提供代测样本,七个工作日内即可为您提供代测数据。欢迎前来咨询,订购。

产品详情

 

 

绵羊表皮结合蛋白5(FABP5) ELISA 试剂盒 

 

 

ELISA 试剂盒检测原理:

笃玛生物(DUMABIO)生产的ELISA试剂盒采用抗体夹心法:将抗某蛋白抗体包被于酶标板上,标本和标准品中的某蛋白与抗体结合,加入化的抗某蛋白抗体,再加入SABC复合物与抗体结合,形成免疫复合物,然后加入TMB显色底物,显色剂显蓝色,zui候加终止液变黄色,游离的成分被洗去。在450 nm处测OD值,某蛋白浓度与OD值之间呈正比,可通过绘制标准曲线计算出标本中某蛋白的浓度。

96T/48T  人白介素1β前体(pro-IL1β) ELISA 试剂盒说明书

ELISA 试剂盒试剂盒组分: 保存温度2-8℃)

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份


密封袋

1个

1个


封板膜

12孔×4条

2片(96)

2-8℃保存

微孔酶标板

1×48

12孔×8条

2-8℃保存

标准品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

 96T/48T  人白介素1β前体(pro-IL1β) ELISA 试剂盒说明书

本试剂盒用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液及其它生物体液。

 

 ELISA 试剂盒标本收集与试剂准备: 

1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原,无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可),血清、血浆避免使用溶血,高血脂标本,标本悬浮物应离心去除,使标本清澈透明。待测样本应尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。

2. 洗涤液配置:用蒸馏水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水)

3. 标准品配制:取7个1.5ml离心管,分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank。从第壹至七管中分别加入标准品/样品稀释液200ul。在第壹管中加入标准品溶液200ul,置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第六管中吸出200ul弃去,第七管为空白对照。

4. 

5. 化抗体工作液配置:使用前20分钟,用化抗体稀释液将100×化抗体稀释成1×工作液,根据所需用量配置,当日使用,剩余弃之。

6. TMB显色液的配置:使用分钟,将TMB显色液A液和B液1:1混合,避光放置备用。

7. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品zui糕值,建议重新检测,请根据实际情况,适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。

 ELISA 试剂盒检测程序:

1. 加样:空白孔加入50μl标准品/样品稀释液,其余孔各加入标准品或待测样品50ul,将反应板混匀后置37℃,40分钟。

2. 洗板:用1×洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,每孔加入1×洗液350μl,每次震荡/浸泡1-2分钟,向滤纸上印干。

3. 空白孔加入100ul化抗体稀释液,其余孔各加入1×的化抗体工作液100ul,混匀后置37℃,30分钟。

4. 洗板:同上。

5. 每孔加入SABC复合物工作液100ul,混匀后置37℃,20分钟。

6. 洗板:同上。

96T/48T  人白介素1β前体(pro-IL1β) ELISA 试剂盒说明书

7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul,混匀后置37 ℃暗处反应10-20分钟(具体显色时间根据显色结果而定)。

8. 每孔加入100ul终止液,混匀,30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

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ELISA 试剂盒结果判断与计算:

1. 所有OD值建议减除空白值后再行计算,如空白OD低于0.1,也可以直接计算。

2. 以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品OD值计算出相应含量,再乘上稀释倍数即可。

 

ELISA 试剂盒试剂盒性能:

1、 检测范围:15.6-1000pg/mL

2、 特异性:同时可检测重组或天然的某种蛋白或抗体,不与其它细胞因子有交叉反应。

3、 重复性:板内,板间变异系数均小于10%。


 ELISA 试剂盒注意事项

1. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶溶解后再配制洗涤液。

3. 检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中个月内用完。

4. 试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。

5. 只用于科研,不能用于临床诊断!

 

试剂盒局限

6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。


试剂盒性能

1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性:不与其它细胞因子反应。

3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。






绵羊表皮结合蛋白5(FABP5) ELISA 试剂盒  

LISA试剂盒技术流程 

双抗体夹心法(检测未知抗原)

间接法(检测未知抗体)

1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。

2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。

4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+"、“-"号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。

2、加样:加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)

3、加酶标抗体:于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。

4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+"、“-"号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

 

 

 

技术提示:

1、混合蛋白溶液时,避免起泡。

2、加校准品与样本时,每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头,


公共组分应该悬臂加样,避免交叉污染。

3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。

4、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。

5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为黄色。

6、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

7、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

8、检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

 

 


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