我们相信好的产品是信誉的保证!
咨询热线:
致力于成为更好的解决方案供应商!
产品中心/ PRODUCTS
简要描述:绵羊肿瘤坏死因子(TNFRSF1B) ELISA 试剂盒:质量稳定,准确性高。笃玛生物全程提供技术指导,确保您实验结果的准确性还提供免费代测服务。您只需提供代测样本,七个工作日内即可为您提供代测数据。欢迎前来咨询,订购。
绵羊肿瘤坏死因子(TNFRSF1B) ELISA 试剂盒
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被兔白细胞介素6(IL-6)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的兔白细胞介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
保存条件及有效期
1.本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中兔白细胞介素6(IL-6)的含量;
2.试剂盒保存:2-8℃;
3.有效期:6个月。
标本的采集及保存
1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 (注:标本溶血会影响**检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。)
标本的稀释原则
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。计算浓度时,稀释了“N"倍,标本的浓度应再乘以“N"。
标准品的稀释原则
2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为300 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
标记抗体的稀释原则
临用前以标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl标记抗体加990μl标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加标记抗体工作液 100μl(取1μl标记抗体加99μl标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。
5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
绵羊肿瘤坏死因子(TNFRSF1B) ELISA 试剂盒
1.用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
2.每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是加底物溶液及2N 。测量时先用此孔调OD值至零。
3.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
4.未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5.建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
2.洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
3.一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。
5.如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请乘以稀释倍数。
6.在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
7.底物请避光保存。
8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
注意事项
收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在4 ℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及时分装后放在-20 ℃或-70 ℃条件下保存。避免反复冻融。标本2 -8 ℃可保存48 小时,-20 ℃可保存1 个月。-70度可保存6 个月。部分激素类标本需添加。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
试剂盒性能
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15%
其他相关产品
DM-Cat4575 | 牛髓样前体细胞抑制因子2(MPIF2) ELISA 试剂盒 | Cattle MPIF2 (Myeloid Progenitor Inhibitory Factor 2) ELISA Kit |
DM-Cat4576 | 牛巨噬细胞炎性蛋白4α(MIP4α) ELISA 试剂盒 | Cattle MIP4α (Macrophage Inflammatory Protein 4 Alpha) ELISA Kit |
DM-Cat4577 | 牛皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK) ELISA 试剂盒 | Cattle CTACK (Cutaneous T-cell Attracting Chemokine) ELISA Kit |
DM-Cat4578 | 牛可溶性CD14分子(sCD14) ELISA 试剂盒 | Cattle sCD14 (Soluble Cluster of Differentiation14) ELISA Kit |
DM-Cat4579 | 牛免疫球蛋白E Fc段受体Ⅱ(FcεRⅡ/CD23) ELISA 试剂盒 | Cattle FcεRII/CD23 (Receptor II for the Fc Region of Immunoglobulin E) ELISA Kit |
DM-Cat4580 | 牛白细胞分化抗原CD40配体(CD40L/TNFSF5) ELISA 试剂盒 | Cattle CD40L/TNFSF5 (Cluster of Differentiation 40 Ligand) ELISA Kit |
DM-Cat4581 | 牛CD163分子(CD163) ELISA 试剂盒 | Cattle CD163 (Cluster of Differentiation 163) ELISA Kit |
DM-Cat4582 | 牛软骨糖蛋白39(GP39) ELISA 试剂盒 | Cattle GP39 (Glycoprotein 39, Cartilage) ELISA Kit |
DM-Cat4583 | 牛丛生蛋白(CLU) ELISA 试剂盒 | Cattle CLU (Clusterin) ELISA Kit |
DM-Cat4584 | 牛睫状神经营养因子(CNTF) ELISA 试剂盒 | Cattle CNTF (Ciliary Neurotrophic Factor) ELISA Kit |
DM-Cat4585 | 牛组织因子(TF) ELISA 试剂盒 | Cattle TF (Tissue Factor) ELISA Kit |
DM-Cat4586 | 牛补体因子D(CFD) ELISA 试剂盒 | Cattle CFD (Complement Factor D) ELISA Kit |
DM-Cat4587 | 牛Corin蛋白(CRN) ELISA 试剂盒 | Cattle CRN (Corin) ELISA Kit |
DM-Cat4588 | 牛C反应蛋白(CRP) ELISA 试剂盒 | Cattle CRP (C-Reactive Protein) ELISA Kit |
DM-Cat4589 | 牛趋化因子C-X3-C-基元配体1(CX3CL1) ELISA 试剂盒 | Cattle CX3CL1 (Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1) ELISA Kit |
DM-Cat4590 | 牛生长调节致癌基因α(GROα/CXCL1) ELISA 试剂盒 | Cattle GROα/CXCL1 (Growth Regulated Oncogene Alpha) ELISA Kit |
DM-Cat4591 | 牛上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78) ELISA 试剂盒 | Cattle ENA-78 (Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78) ELISA Kit |
DM-Cat4592 | 牛粒细胞趋化蛋白2(GCP-2) ELISA 试剂盒 | Cattle GCP-2 (Granulocyte Chemotactic Protein 2) ELISA Kit |
DM-Cat4593 | 牛白介素8(IL-8) ELISA 试剂盒 | Cattle IL-8 (Interleukin 8) ELISA Kit |
DM-Cat4594 | 牛抗载脂蛋白抗体(AAHA) ELISA 试剂盒 | Cattle AAHA (Anti-Apolipoprotein Antibody) ELISA Kit |
DM-Cat4595 | 牛10kDa干扰素γ诱导蛋白(IP-10/CXCL10) ELISA 试剂盒 | Cattle IP-10/CXCL10 (Interferon Gamma Induced Protein 10kDa) ELISA Kit |
DM-Cat4596 | 牛干扰素诱导T细胞α亚族趋化因子 (I-TAC) ELISA 试剂盒 | Cattle I-TAC (Interferon Inducible T-cell Alpha Chemoattractant) ELISA Kit |
DM-Cat4597 | 牛基质细胞衍生因子1(SDF-1) ELISA 试剂盒 | Cattle SDF-1 (Stromal Cell Derived Factor 1) ELISA Kit |
DM-Cat4598 | 牛B-淋巴细胞趋化因子(BLC) ELISA 试剂盒 | Cattle BLC (B-Lymphocyte Chemoattractant) ELISA Kit |
DM-Cat4599 | 牛趋化因子CXC配体16(CXCL16) ELISA 试剂盒 | Cattle CXCL16 (Chemokine C-X-C-Motif Ligand 16) ELISA Kit |
网站二维码