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犬肌红蛋白(MYO) ELISA 试剂盒

  • 产品型号:96T/48T
  • 更新时间:2024-03-13

简要描述:犬肌红蛋白(MYO) ELISA 试剂盒:质量稳定,准确性高。笃玛生物全程提供技术指导,确保您实验结果的准确性还提供免费代测服务。您只需提供代测样本,七个工作日内即可为您提供代测数据。欢迎前来咨询,订购。

产品详情

犬肌红蛋白(MYO) ELISA 试剂盒
试验原理
     本试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物AB,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。


完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:
1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
3)酶的底物;
4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);
5)结合物及标本的稀释液;
6)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;
7)酶反应终止液,常用的HRP反应终止液为硫酸,其浓度按加量及比色液的*终体积而异,在板式ELISA中一般采用2mol/L

 
自备材料
1)蒸馏水。
2)加样器:5ul10ul50ul100ul200ul500ul1000ul
3)振荡器及磁力搅拌器等。

 
试剂盒安全性
1)避免直接接触终止液和底物AB。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2)实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。


操作注意事项
1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物AB液时,避免使用带金属部分的加样器。
5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。


产品优势
1.品种齐全、质量可靠、灵敏度高、稳定性好、操作简便。
2.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3.重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 


试剂盒样品收集、处理及保存方法
1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 
犬肌红蛋白(MYO) ELISA 试剂盒
标本要求
ELISA检测试剂盒标本要求

1.血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。2.血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mLPBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。Zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。注:标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。


操作流程
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物AB50μL37℃避光孵育15min
7.每孔加入终止液50μL15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

 
试剂盒试剂的准备
1)标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2)洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

试剂盒操作步骤
1)使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2)根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液11稀释后加入50ul于反应孔内。

3)加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37温育1小时。

4)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5)每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37温育30分钟。

6)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7)每孔加入底物AB50ul,轻轻振荡混匀,37温育10分钟。避免光照。

8)取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9)在450nm波长处测定各孔的OD值。

 
试剂盒局限
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。


试剂盒试剂盒性能
1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%

 
试剂盒结果判断与分析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的待测物质标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的待测物质含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

 
ELISA检测试剂盒承诺
     公司长期与各大高校、医院及科研单位保持着良好的合作关系,公司的产品质量及服务态度得到了他们的一致认可。笃玛生物本着客户至上的原则为客户提供优质产品,公司承诺产品有任何质量的问题免费包退换(非人为因素造成的)。公司提供免费代测服务,并且承诺收到样本七个工作日出结果,确保数据的准确性。

 

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