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猪神经纤维网蛋白1(NRP1) ELISA 试剂盒

  • 产品型号:
  • 更新时间:2024-02-02

简要描述:猪神经纤维网蛋白1(NRP1) ELISA 试剂盒
上海笃玛生物科技有限公司长期为高校及医院等研究机构提供各类品质过硬,价格实惠,售后完善的生化试剂,公司拥有完善的库存及供应体系以及高效稳定的利纯化技术,保证产品均能现货供应和产品质量的稳定性,相关活动信息可联系客服。

产品详情


猪神经纤维网蛋白1(NRP1) ELISA 试剂盒



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实验原理


酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种基于抗原抗体反应的免疫学检测方法。其基本原理是利用抗原抗体的特异性结合,通过酶对底物反应的显色反应,对样本中的待测物质进行定量或定性分析。ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、适用范围广等特点,因此在生物医学研究、临床诊断和食品安全检测等领域得到了广泛应用。


猪神经纤维网蛋白1(NRP1) ELISA 试剂盒

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样品收集、处理及保存方法


1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

3. 细胞上清液:3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。


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   标本的稀释原则:首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。计算浓度时,稀释了“N"倍,标本的浓度应再乘以“N"。 

   标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为300 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 

   生物su标记抗体的稀释原则:临用前以生物su标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su标记抗体加990μl生物su标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 

   辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 


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实验步骤


1. 准备试剂盒:将试剂盒从冰箱中取出,室温放置30分钟以上,使试剂盒恢复至室温。

2. 加样:分别向各孔中加入标准品、待测样本和空白孔,每孔加入50μl。

3. 孵育:用封板胶纸封住反应孔,轻轻振荡混匀,37℃孵育1小时。

4. 洗涤:甩去孔内液体,用洗涤液充分洗涤4-5次,每次30秒。

5. 加酶标二抗:每孔加入50μl酶标二抗溶液,轻轻振荡混匀,37℃孵育30分钟。

6. 洗涤:甩去孔内液体,用洗涤液充分洗涤4-5次,每次30秒。

7. 加底物:每孔加入50μl底物溶液,轻轻振荡混匀,37℃孵育15-20分钟。

8. 终止反应:每孔加入50μl终止液,轻轻振荡混匀。

9. 读数:用酶标仪在450nm波长处读取各孔的光密度值。



ELISA试剂盒实验数据的计算处理方法

1、拟和曲线:

输入第一行: 浓度值, 如0 10 50 100 400

输入第二行:该浓度下的调整后的od值,如0 0.586 1.397 1.997 3.42

选择这些输入的数据,用插入里的图表按钮,进入图表向导,在“标准类型"中选择“xy散点图";在“子图表类型"中选择“折线散点图",按“下一步";选择“系列产生在行",按“下一步";数据标志,可以填写:如数据y轴,OD值;数据x轴,浓度;按下一步,点击完成。可得曲线图。

单击曲线,按右键,选择“添加趋势线",在类型中,选择多项式;在选项中,选择显示公式,选择显示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面说的方法: 双击图表,把它输入到图表的数据中,就可以拟和曲线。

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2、计算浓度:

第一次实验:

标准曲线为:

y = -4E-05x2 + 0.026x

R2 = 0.9745

为例,已知OD值,计算浓度。

由于y = -4E-05x2 + 0.026x,可以得到:

4E-05x2 -0.026x +y=0

ax2 +bx +y=0



注意事项:

A 仔细阅读说明书。

B 检查试剂盒标签上的有效期。如果超过有效期,请勿使用。

C 按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积)。

D 标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意低温保存。

E 准备好所有实验额外所需物品,(比如移液器,试管,清洗器,酶标仪)。

F 按说明书将所用试剂平衡至室温,根据检测标本数量确定所需试剂的量。

G 检查试剂盒内每种试剂的贮存条件,保证所有试剂均按照试剂盒内说明书推荐的条件存储。

H 检查不稳定或者变质的试剂溶液(比如沉淀或变色)。有些试剂,比如标准品稀释液或者检测稀释液,可能在设计时就含有沉淀物。所有试剂在滴入酶标板之前,必需充分混匀。而由于沉淀物的特性,在加入酶标板之前,必需不停搅拌。

I 保证充分的孵育时间和温度。

J 切勿使用不同生产批号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。

K 在混合或溶解蛋白溶液时,避免泡沫产生。

L 在实验开始之前,安排好实验流程。

M 在实验开始之前,清洁工作台。

N 若有问题,应与我公司或代理商的技术支持联系


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ELISA试剂盒适用行业


ELISA试剂盒广泛应用于生命科学研究、临床医学和工业等领域。

1.在生命科学研究领域,ELISA试剂盒可以用于检测细胞因子、激素、酶、抗体等分子的含量和活性,用于生理学、免疫学、分子生物学等研究领域。

2.在临床医学诊断中,ELISA试剂盒可以用于检测血清中的肿瘤标志物、病毒抗体、心肌酶等指标,用于临床诊断及疾病监测。

3.在食品安全检测中,ELISA试剂盒可以用于检测食品中的抗生素残留、农药残留等有害物质,用于食品质量检测和安全评估。

4.在环境监测中,ELISA试剂盒可以用于检测环境中的化学物质、微生物等污染物,用于环境监测和污染治理。

5.在动物疾病防控中,ELISA试剂盒可以用于检测动物血清中的病毒抗体、细菌抗原等指标,用于动物疫病防控和兽药残留检测。

总之,ELISA试剂盒在许多行业中都有广泛的应用。


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