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简要描述:猪血小板反应蛋白4(TSP-4) ELISA 试剂盒 上海笃玛生物科技有限公司长期为高校及医院等研究机构提供各类品质过硬,价格实惠,售后完善的生化试剂,公司拥有完善的库存及供应体系以及高效稳定的利纯化技术,保证产品均能现货供应和产品质量的稳定性,相关活动信息可联系客服。
猪血小板反应蛋白4(TSP-4) ELISA 试剂盒
产品包装:盒装
性状:瓶装液体
规格:96T/48T
保存条件:2-8℃
保存期限:6个月
运输条件:2-8℃低温运输,用干冰或者生物冰袋低温运输。
猪血小板反应蛋白4(TSP-4) ELISA 试剂盒
实验原理
酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种基于抗原抗体反应的免疫学检测方法。其基本原理是利用抗原抗体的特异性结合,通过酶对底物反应的显色反应,对样本中的待测物质进行定量或定性分析。ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、适用范围广等特点,因此在生物医学研究、临床诊断和食品安全检测等领域得到了广泛应用。
试剂盒组成
1. 酶标板:用于包被抗原和加入酶标抗体;
2. 酶标抗体:与待测血清中的样本结合;
3. 抗原:用于包被酶标板,与待测血清中的样本结合;
4. 阴性对照血清:用于设置阴性和阳性对照;
5. 阳性对照血清:用于设置阴性和阳性对照;
6. 洗涤液:用于清洗酶标板;
7. 底物:用于显色反应;
8. 终止液:用于终止显色反应。
实验步骤
1. 抗原包被:将抗原溶液加入到酶标板孔中,包被抗原,使其在孔底形成一层薄膜。
2. 清洗:清洗酶标板,去除未结合的抗原和其他杂质。
3. 阻断:加入阻断液,封闭酶标板孔中的非特异性结合位点,以减少非特异性结合。
4. 清洗:清洗酶标板,去除未结合的阻断液和其他杂质。
5. 加样:加入待测样本,使其与抗原发生特异性结合。
6. 清洗:清洗酶标板,去除未结合的样本和其他杂质。
7. 加酶标抗体:加入酶标记的抗体,使其与特异性结合的样本中的待测物质发生反应。
8. 清洗:清洗酶标板,去除未结合的酶标抗体和其他杂质。
9. 显色反应:加入底物溶液,发生酶催化反应,产生有色产物。
10. 终止反应:加入终止液,停止酶催化反应。
11. 检测:用酶标仪测定各孔的光密度值,记录数据。
结果分析
根据试剂盒提供的标准品浓度及对应的OD值,利用标准品绘制的标准曲线,计算待测样品的浓度。一般采用拟合曲线法或直线回归法进行数据处理,通过计算得到待测样品的浓度。
做ELISA标准曲线时需要重点注意的细节问题:
1、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度,即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限和下限;而对于呈S型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡度陡段,即曲线几乎成直线的范围内。
2、检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。
3、标准曲线的样品数一般为7个点,但至少要保证有5个点。
4、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数R至少要大于0.98,对于有些实验,至少要0.99甚至是0.999。
5、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。
6、好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。
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