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猪可溶性CD14分子(sCD14) ELISA 试剂盒

  • 产品型号:
  • 更新时间:2024-02-01

简要描述:猪可溶性CD14分子(sCD14) ELISA 试剂盒
免费代测 售后无忧 可按照要求定制
方便快捷 用途广泛
特异性强 重复性好 灵敏度高

产品详情

猪可溶性CD14分子(sCD14) ELISA 试剂盒  


检测前准备工作:


1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液应为室温)。当日使用。

3. 标准品: 于10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中,旋紧管盖,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀释(注:不要直接在反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓度:按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中,混匀即可,其余浓度依此类推。 

4. 生物su化抗体工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以生物su化抗体稀释液稀释浓缩生物su化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

当日使用。


猪可溶性CD14分子(sCD14) ELISA 试剂盒   

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实验原

1. 抗原抗体反应

ELISA试剂盒中的抗原或抗体被固定在固相载体上,当加入待测样本时,样本中的抗原或抗体与固相载体上的抗原或抗体发生反应,形成抗原抗体复合物。

2. 酶标记物的结合

将酶标记物与特异性抗体或抗原结合,形成酶标记抗体或抗原。酶标记物在反应中起到催化作用,加速反应进程,提高检测灵敏度。

3. 酶促反应

在酶标记物与抗原抗体复合物结合后,加入底物溶液,底物在酶的催化下发生氧化还原反应,产生颜色变化。颜色深浅与待测样本中的抗原或抗体浓度成正比。

4. 吸光度检测

将反应体系中的吸光度进行测量,通过比较标准品溶液与待测样本溶液的吸光度值,即可计算出待测样本中的抗原或抗体浓度。


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实验步骤

1. 准备试剂盒:将试剂盒从冰箱中取出,室温放置30分钟以上,使试剂盒恢复至室温。

2. 加样:分别向各孔中加入标准品、待测样本和空白孔,每孔加入50μl。

3. 孵育:用封板胶纸封住反应孔,轻轻振荡混匀,37℃孵育1小时。

4. 洗涤:甩去孔内液体,用洗涤液充分洗涤4-5次,每次30秒。

5. 加酶标二抗:每孔加入50μl酶标二抗溶液,轻轻振荡混匀,37℃孵育30分钟。

6. 洗涤:甩去孔内液体,用洗涤液充分洗涤4-5次,每次30秒。

7. 加底物:每孔加入50μl底物溶液,轻轻振荡混匀,37℃孵育15-20分钟。

8. 终止反应:每孔加入50μl终止液,轻轻振荡混匀。

9. 读数:用酶标仪在450nm波长处读取各孔的光密度值。


试剂盒组成



试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1


封板膜

2片(48

2片(96


密封袋

1

1


酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品

0.5ml×1瓶

0.5ml×1

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

20倍浓缩洗涤液

20ml×1

23ml×1

2-8℃保存














实验注意事项


1. 保证试剂盒的质量:选择正规厂家生产的试剂盒,确保试剂盒的质量和稳定性。

2. 严格控制实验条件:实验过程中要严格控制温度、pH值、离子强度等条件,以保证实验结果的准确性。

3. 避免交叉污染:实验过程中要避免交叉污染,确保每个步骤使用的试剂和材料都是清洁无污染的。

4. 标准化操作:实验操作要标准化,严格按照试剂盒说明书进行操作,避免人为误差对实验结果的影响。

5. 定期校准:定期对实验仪器进行校准,确保仪器的准确性和稳定性。

6. 保存好实验数据:实验过程中要保存好实验数据,以便后续分析和处理。


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结果判断

 绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。


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试剂盒会出现的问题及解决办法:

1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:未加入酶标记物。

解决办法:请按照操作步骤进行。

b.原因:试剂盒内容物未能充分回。

解决办法:确定试剂盒内容物回温后再进行操作。

c.原因:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,适当延长温育时间。

d.原因:未使用试剂盒的清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。

e.原因:试剂盒已过有效期限。

解决办法:请更换成仍在有效期限内的试剂盒。

2. 标准曲线线性不佳,或是平行性不好。

a.原因:温育位置避光不好或受到气流干扰。

解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。

b.原因:操作时间拖太久。

解决办法:请在方法熟练后再进行操作。

c.原因:微孔间相互污染。

解决办法: 加样品时,请小心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污染。

d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不一致。

解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。

e.原因:添加样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品或试剂时,吸头请勿接触微孔。

f.原因:洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。

解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。

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3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。

a.原因:室温太高(>25℃)。

解决办法: 若无法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育时间。

b.原因:底物溶液受到污染。

解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。

c.原因:反应时间超过太久。

解决办法:请控制反应时间。

d.原因:酶标记物污染了盒内其它试剂。

解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确保无残留)

4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

a.原因:微孔中的试剂未能充分混合。

解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

b.原因:洗板过程发生问题(同2-f.)。

解决办法:请参考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记物的量不一致。

解决办法: 请参考2-d.




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