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猴5脂加氧酶(5-LO)酶联免疫试剂盒

  • 产品型号:
  • 更新时间:2024-01-30

简要描述:猴5脂加氧酶(5-LO)酶联免疫试剂盒
质量稳定,准确性高。笃玛生物全程提供技术指导,确保您实验结果的准确性还提供免费代测服务。您只需提供代测样本,七个工作日内即可为您提供代测数据。欢迎前来咨询,订购。

产品详情

供体外研究使用,不用于临床诊断!


猴5脂加氧酶(5-LO)酶联免疫试剂盒    


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产品规格:96T/48T(可拆)

产品数量:咨询

产品应用:ELISA实验

产品货期:现货

有效期:6个月

保存条件:2-8℃


准备工作


1.孔板室温平衡1小时

2.做好布板图谱

3.样本解冻

4.准备各型号的移液枪、枪头、量筒

5.准备双蒸水

6.根据样本量配好样本希释液

7.根据样本量及洗板次数配好洗液

8.若需要提前设置好振板器、洗板器

9.准备足够量的擦手纸

10.根据说明书提示,溶解标准品

11.配制不同浓度的标准品

12.配制质控品

13.根据预实验结果稀释样本

14.准备好封板膜


猴5脂加氧酶(5-LO)酶联免疫试剂盒 

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样本处理


在处理样本时,需要保证无菌操作,避免污染。同时,需要按照试剂盒说明书的要求,将样本进行适当的稀释和处理。如果样本中存在杂质或颗粒物,需要*行离心或过滤处理。


注意事项


在进行ELISA检测时,需要注意以下几点:

1. 保证试剂盒的质量:选择质量可靠、经过认证的试剂盒,避免使用过期或质量不稳定的试剂。

2. 标准化操作:按照试剂盒说明书进行标准化操作,避免操作过程中的人为误差。

3. 避免交叉污染:在实验过程中,要特别注意防止样品和试剂之间的交叉污染,以免影响检测结果的准确性。

4. 温度控制:ELISA检测需要在恒温条件下进行,因此要确保实验过程中温度的稳定和准确性。

5. 空白吸光度值:在实验过程中,要特别注意空白吸光度值的稳定性,避免其对检测结果的影响。

6. 实验数据的处理:对实验数据进行正确的处理和分析,包括对异常值的处理、数据转换等,以确保结果的准确性和可靠性。

7. 质量控制:在实验过程中,应进行必要的质量控制,如定期进行室内质控和室间质评等,以确保实验室检测结果的准确性。


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操作步骤:


1. 加样:设置空白孔、标准孔和待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl。注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。每次实验都应制作标准曲线。如果样品浓度过高,可以用样品稀释液进行稀释,使样品符合试剂盒的检测范围。

2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物s标记抗体工作液 100μl(取1μl生物su标记抗体加99μl生物su标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。

3. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物su标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

5. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

6. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后15分钟以内进行检测。


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试剂盒会出现的问题及解决办法:



1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:未加入酶标记物。

解决办法:请按照操作步骤进行。

b.原因:试剂盒内容物未能充分回。

解决办法:确定试剂盒内容物回温后再进行操作。

c.原因:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,适当延长温育时间。

d.原因:未使用试剂盒的清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。

e.原因:试剂盒已过有效期限。

解决办法:请更换成仍在有效期限内的试剂盒。

2. 标准曲线线性不佳,或是平行性不好。

a.原因:温育位置避光不好或受到气流干扰。

解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。

b.原因:操作时间拖太久。

解决办法:请在方法熟练后再进行操作。

c.原因:微孔间相互污染。

解决办法: 加样品时,请小心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污染。

d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不一致。

解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。

e.原因:添加样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品或试剂时,吸头请勿接触微孔。

f.原因:洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。

解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。

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3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。

a.原因:室温太高(>25℃)。

解决办法: 若无法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育时间。

b.原因:底物溶液受到污染。

解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。

c.原因:反应时间超过太久。

解决办法:请控制反应时间。

d.原因:酶标记物污染了盒内其它试剂。

解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确保无残留)

4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

a.原因:微孔中的试剂未能充分混合。

解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

b.原因:洗板过程发生问题(同2-f.)。

解决办法:请参考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记物的量不一致。

解决办法: 请参考2-d.


技术小提示:


1. 当混合或重溶蛋白溶液时,尽量避免起沫。

2. 为了避免交叉感染,配置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽。

3. 每次孵育时,请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4. 混合后的显色底物在上板前应为无色,请避光保存;加入微孔板后,将由无色变成不同深度的蓝色。

5. 终止液上板顺序应同显色底物上板顺序一致;加入终止液后,孔内颜色由蓝变黄;若孔内有绿色,则表明孔内液体未混匀;请充分混合。


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