猴细胞周期素D2(CCND2)酶联免疫试剂盒

猴细胞周期素D2(CCND2)酶联免疫试剂盒  

实验原理

酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种基于抗原抗体反应的免疫学检测方法。其基本原理是利用抗原抗体的特异性结合，通过酶对底物反应的显色反应，对样本中的待测物质进行定量或定性分析。ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、适用范围广等特点，因此在生物医学研究、临床诊断和食品安全检测等领域得到了广泛应用。

猴细胞周期素D2(CCND2)酶联免疫试剂盒 

检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。

3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为8000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品：取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。 

4. 生物su化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物su化抗体稀释液稀释浓缩生物su化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

当日使用。

实验步骤

1. 准备：准备好所有试剂、材料和器具。

2. 温育：将包被有特异性抗体的酶标板放入37℃温箱中温育30分钟。

3. 加样：分别向各孔中加入标准品、待测样本，轻轻混匀。

4. 温育：将酶标板放入37℃温箱中继续温育30分钟。

5. 洗涤：清洗酶标板，除去未结合的抗原抗体。

6. 加酶标二抗：向各孔中加入酶标二抗，轻轻混匀。

7. 温育：将酶标板放入37℃温箱中继续温育30分钟。

8. 洗涤：清洗酶标板，除去未结合的酶标二抗。

9. 加底物溶液：向各孔中加入底物溶液，轻轻混匀。

10. 显色：将酶标板放入37℃温箱中继续温育15分钟。

11. 终止：向各孔中加入终止液，混匀。

12. 测量：在450nm波长下测量各孔的光密度值（OD值）。

操作注意事项

1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3. 浓度为 0 的标准品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。

7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

结果判断:

1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 

洗板方法

1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。

2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

新手实验注意事项：

新手以及那些没有固定协作供货商的顾客购买时往往有两种疑虑，首要便是价格，其次，便是质量，国内试剂盒相关于进口试剂盒来说价格自然会低许多。

关于新手的视点来说价格低并不必定就会考虑购买，同时还在犹疑质量问题，由于没有用过新品牌的试剂盒心中总是在怀疑。

利用交叉实验即可辨别是否造假：小鼠ELISA检测试剂盒说明书

1、取出购买的试剂盒A的包被板两条。

2、一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线。

3、另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线。

4、后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物。

我司在科研领域积累了丰富的经验，正是为了帮助中国的相关单位能够利用我司的经验与技术优势，为中国民众提供更安全，快捷的生命领域。

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