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猴甲状旁腺激素(PTH)酶联免疫试剂盒

  • 产品型号:
  • 更新时间:2024-01-29

简要描述:猴甲状旁腺激素(PTH)酶联免疫试剂盒
质量稳定,准确性高。笃玛生物全程提供技术指导,确保您实验结果的准确性还提供免费代测服务。您只需提供代测样本,七个工作日内即可为您提供代测数据。欢迎前来咨询,订购。

产品详情



猴甲状旁腺激素(PTH)酶联免疫试剂盒



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实验原


酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种基于抗原抗体反应的免疫学检测方法。其基本原理是利用抗原抗体的特异性结合,通过酶对底物反应的显色反应,对样本中的待测物质进行定量或定性分析。ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、适用范围广等特点,因此在生物医学研究、临床诊断和食品安全检测等领域得到了广泛应用。


猴甲状旁腺激素(PTH)酶联免疫试剂盒

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检测前准备工作:


1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液应为室温)。当日使用。

3. 标准品: 于10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中,旋紧管盖,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀释(注:不要直接在反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓度:按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中,混匀即可,其余浓度依此类推。 

4. 生物su化抗体工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以生物su化抗体稀释液稀释浓缩生物su化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

当日使用。


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实验步骤


1. 准备:准备好所有试剂、材料和器具。

2. 温育:将包被有特异性抗体的酶标板放入37℃温箱中温育30分钟。

3. 加样:分别向各孔中加入标准品、待测样本,轻轻混匀。

4. 温育:将酶标板放入37℃温箱中继续温育30分钟。

5. 洗涤:清洗酶标板,除去未结合的抗原抗体。

6. 加酶标二抗:向各孔中加入酶标二抗,轻轻混匀。

7. 温育:将酶标板放入37℃温箱中继续温育30分钟。

8. 洗涤:清洗酶标板,除去未结合的酶标二抗。

9. 加底物溶液:向各孔中加入底物溶液,轻轻混匀。

10. 显色:将酶标板放入37℃温箱中继续温育15分钟。

11. 终止:向各孔中加入终止液,混匀。

12. 测量:在450nm波长下测量各孔的光密度值(OD值)。


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操作注意事项


1. 试剂盒保存在 2-8℃,使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

3. 浓度为 0 的标准品可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍,终结果乘以5才是样本终浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

6. 若中英文说明书有误,请以中文说明书为准。

7. 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按 1:20 稀释,即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

8. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


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结果判断:


1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设置复孔,则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标,标准品的浓度为纵坐标,绘出标准曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.3或1.4,在软件界面既可根据样品OD值,由标准曲线查出相应的浓度,乘以稀释倍数;亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。 


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洗板方法


1.手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置 1min 后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板 5次。

2.自动洗板机:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。


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新手实验注意事项:


新手以及那些没有固定协作供货商的顾客购买时往往有两种疑虑,首要便是价格,其次,便是质量,国内试剂盒相关于进口试剂盒来说价格自然会低许多。

关于新手的视点来说价格低并不必定就会考虑购买,同时还在犹疑质量问题,由于没有用过新品牌的试剂盒心中总是在怀疑。

利用交叉实验即可辨别是否造假:小鼠ELISA检测试剂盒说明书

1、取出购买的试剂盒A的包被板两条。

2、一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线。

3、另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线。

4、后续操作按照试剂盒说明书进行,加检测抗体、酶复合物和底物。

我司在科研领域积累了丰富的经验,正是为了帮助中国的相关单位能够利用我司的经验与技术优势,为中国民众提供更安全,快捷的生命领域。


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