猴蛋白聚糖4(PRG4)酶联免疫试剂盒

仅供体外研究使用，不用于临床诊断!

猴蛋白聚糖4(PRG4)酶联免疫试剂盒 

产品规格：96T/48T（可拆）

产品数量：咨询

产品应用：ELISA实验

产品货期：现货

有效期：6个月

保存条件：2-8℃

猴蛋白聚糖4(PRG4)酶联免疫试剂盒

样品收集、处理及保存方法

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。

标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。计算浓度时，稀释了“N"倍，标本的浓度应再乘以“N"。 

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 

生物su标记抗体的稀释原则：临用前以生物su标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su标记抗体加990μl生物su标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 

准备工作

1.孔板室温平衡1小时

2.做好布板图谱

3.样本解冻

4.准备各型号的移液枪、枪头、量筒

5.准备双蒸水

6.根据样本量配好样本希释液

7.根据样本量及洗板次数配好洗液

8.若需要提前设置好振板器、洗板器

9.准备足够量的擦手纸

10.根据说明书提示，溶解标准品

11.配制不同浓度的标准品

12.配制质控品

13.根据预实验结果稀释样本

14.准备好封板膜

操作步骤：

1. 加样：设置空白孔、标准孔和待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl。注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。每次实验都应制作标准曲线。如果样品浓度过高，可以用样品稀释液进行稀释，使样品符合试剂盒的检测范围。

2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物su标记抗体工作液 100μl（取1μl生物su标记抗体加99μl生物su标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

3. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物su标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

5. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

6. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。

实验注意事项

1. 保证试剂盒的质量：选择正规厂家生产的试剂盒，确保试剂盒的质量和稳定性。

2. 严格控制实验条件：实验过程中要严格控制温度、pH值、离子强度等条件，以保证实验结果的准确性。

3. 避免交叉污染：实验过程中要避免交叉污染，确保每个步骤使用的试剂和材料都是清洁无污染的。

4. 标准化操作：实验操作要标准化，严格按照试剂盒说明书进行操作，避免人为误差对实验结果的影响。

5. 定期校准：定期对实验仪器进行校准，确保仪器的准确性和稳定性。

6. 保存好实验数据：实验过程中要保存好实验数据，以便后续分析和处理。

结果分析

根据试剂盒提供的标准品浓度及对应的OD值，利用标准品绘制的标准曲线，计算待测样品的浓度。一般采用拟合曲线法或直线回归法进行数据处理，通过计算得到待测样品的浓度。

酶联免疫吸附法的优点

酶联免疫吸附法（ELISA）的优点包括：

1.高灵敏度：ELISA可以检测出微量的抗原或抗体，其灵敏度通常比其他免疫学方法更高。

2.高特异性：ELISA仅与特定的抗原或抗体结合，因此不易受到其他物质的干扰，具有较高的特异性。

3.快速：ELISA操作简便、快速，可以在短时间内得到结果。

4.易操作：ELISA实验操作相对简单，易于标准化和自动化，因此适合于大规模样品的检测。

5.应用范围广：ELISA可以用于检测多种生物分子，如蛋白质、多肽、激素等，因此在医学、生物领域得到广泛应用。

6.无放射性核素污染：与放射免疫测定法相比，ELISA不需要使用放射性核素，因此更为安全、环保。

总之，ELISA是一种高灵敏度、高特异性、快速、易操作的免疫学技术，具有广泛的应用前景。

[售后]

试剂盒售后：本公司出售的试剂盒均保质保量，质量问题均可免费退换，另提供免费代测服务。

细胞售后：

1、细胞运输丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2、细胞收到当天以及第2,3天请拍照，未告知的视为产品合格。4-10天内出现问题，请提供细胞照片和细胞出现问题的照片以及细胞相关操作的详细步骤，并跟我公司人员及时沟通判定是否重发，具体可以参照我或者随货说明书相关售后条款。

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