猴广谱细胞角蛋白(P-CK)酶联免疫试剂盒

猴广谱细胞角蛋白(P-CK)酶联免疫试剂盒 

实验原理

本试剂盒基于检测样本的特异性抗体包被酶标板，加入待测样本，样本与包被在酶标板上的特异性抗体结合，形成免疫复合物。清洗后加入酶标二抗，与免疫复合物结合，形成完整的三明治复合物。再加入底物溶液，底物在酶的作用下变色，颜色的深浅与样本的浓度呈正相关。最后加入终止液，使反应停止，在450nm波长下测量各孔的光密度值（OD值），通过标准曲线计算样本的浓度。

猴广谱细胞角蛋白(P-CK)酶联免疫试剂盒

样本处理

1.组织取出前尽量进行心脏灌流

2.组织表面不能有毛发等不相关组分

3.组织称重(mg)后立即放入EP管中

4.向EP管中加入9倍量的PBS (μL)

5.用匀浆机进行组织匀浆

6.离心

7.小心吸取上清

样品收集、处理及保存方法

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。

实验注意事项

1. 保证试剂盒的质量：选择正规厂家生产的试剂盒，确保试剂盒的质量和稳定性。

2. 严格控制实验条件：实验过程中要严格控制温度、pH值、离子强度等条件，以保证实验结果的准确性。

3. 避免交叉污染：实验过程中要避免交叉污染，确保每个步骤使用的试剂和材料都是清洁无污染的。

4. 标准化操作：实验操作要标准化，严格按照试剂盒说明书进行操作，避免人为误差对实验结果的影响。

5. 定期校准：定期对实验仪器进行校准，确保仪器的准确性和稳定性。

6. 保存好实验数据：实验过程中要保存好实验数据，以便后续分析和处理。

实验步骤

1. 准备：准备好所有试剂、材料和器具。

2. 温育：将包被有特异性抗体的酶标板放入37℃温箱中温育30分钟。

3. 加样：分别向各孔中加入标准品、待测样本，轻轻混匀。

4. 温育：将酶标板放入37℃温箱中继续温育30分钟。

5. 洗涤：清洗酶标板，除去未结合的抗原抗体。

6. 加酶标二抗：向各孔中加入酶标二抗，轻轻混匀。

7. 温育：将酶标板放入37℃温箱中继续温育30分钟。

8. 洗涤：清洗酶标板，除去未结合的酶标二抗。

9. 加底物溶液：向各孔中加入底物溶液，轻轻混匀。

10. 显色：将酶标板放入37℃温箱中继续温育15分钟。

11. 终止：向各孔中加入终止液，混匀。

12. 测量：在450nm波长下测量各孔的光密度值（OD值）。

结果判断:

1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 

试剂盒 必知说明

1）只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，

2）不能混用其他制造商的产品，只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到好的检测结果。

3）由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。

4）实验结果与试剂盒的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关。

5）请务必准备充足的标本备份。

6）不同批次的同一产品可能会有少许差别，

如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。

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