猴正辅因子4(PC4)酶联免疫试剂盒

猴正辅因子4(PC4)酶联免疫试剂盒

实验原理

酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种基于抗原抗体反应的免疫学检测方法。其基本原理是利用抗原抗体的特异性结合，通过酶对底物反应的显色反应，对样本中的待测物质进行定量或定性分析。ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、适用范围广等特点，因此在生物医学研究、临床诊断和食品安全检测等领域得到了广泛应用。

ELISA试剂盒用法

1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml，酶标板中每孔加入50μl，室温、4℃或37℃过夜包被。

2.洗涤：弃包被液（用力拍干，再用无尘纸吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次（每孔均要加满），每次3min~5min。

3.封闭：每孔加封闭液（1%BSA）250μl，37℃封闭2h。

4.洗涤：用1×PBST洗涤液洗板3次，每次3min~5min。

5.加样：加入已经稀释好的样品，37℃反应1h。一般血清样本加入50-100μl，充分混匀。

6.洗涤：用洗涤液洗板3次，每次3min~5min。

7.加入酶标试剂：每孔加入100μl酶标溶液，37℃，1h。

8.洗涤：用洗涤液洗板3次，每次3min~5min。

9.显色：每孔先加入显色剂A液50μl，再加入显色剂B液50μl，37℃避光10-15min。

10.终止及测定：加入50μl终止液，终止反应，用酶标仪在450nm波长处测OD值。

猴正辅因子4(PC4)酶联免疫试剂盒 

实验步骤

1. 抗原包被：将抗原溶液加入到酶标板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一层薄膜。

2. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的抗原和其他杂质。

3. 阻断：加入阻断液，封闭酶标板孔中的非特异性结合位点，以减少非特异性结合。

4. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的阻断液和其他杂质。

5. 加样：加入待测样本，使其与抗原发生特异性结合。

6. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的样本和其他杂质。

7. 加酶标抗体：加入酶标记的抗体，使其与特异性结合的样本中的待测物质发生反应。

8. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的酶标抗体和其他杂质。

9. 显色反应：加入底物溶液，发生酶催化反应，产生有色产物。

10. 终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。

11. 检测：用酶标仪测定各孔的光密度值，记录数据。

实验注意事项

1. 保证试剂盒的质量：选择正规厂家生产的试剂盒，确保试剂盒的质量和稳定性。

2. 严格控制实验条件：实验过程中要严格控制温度、pH值、离子强度等条件，以保证实验结果的准确性。

3. 避免交叉污染：实验过程中要避免交叉污染，确保每个步骤使用的试剂和材料都是清洁无污染的。

4. 标准化操作：实验操作要标准化，严格按照试剂盒说明书进行操作，避免人为误差对实验结果的影响。

5. 定期校准：定期对实验仪器进行校准，确保仪器的准确性和稳定性。

6. 保存好实验数据：实验过程中要保存好实验数据，以便后续分析和处理。

ELISA试剂盒实验数据的计算处理方法

1、拟和曲线：

输入第一行： 浓度值， 如0 10 50 100 400

输入第二行：该浓度下的调整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

选择这些输入的数据，用插入里的图表按钮，进入图表向导，在“标准类型"中选择“xy散点图";在“子图表类型"中选择“折线散点图"，按“下一步";选择“系列产生在行"，按“下一步";数据标志，可以填写：如数据y轴，OD值;数据x轴，浓度;按下一步，点击完成。可得曲线图。

单击曲线，按右键，选择“添加趋势线"，在类型中，选择多项式;在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面说的方法： 双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。

洗板方法

1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。

2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

植物样本处理：

植物组织的提取，不管是根茎组织还是叶片组织还是果实组织，都应该采用鲜重的计重方式，一般要遵循以下原则：

    1.称取的组织重量不能低于50mg。

    2.匀浆的比例按照10%，即1g组织加9ml的匀浆液，匀浆液一般选取PBS(PH=7.2-7.4)

    3.组织在匀浆器匀浆过程中，匀浆液应该分2次加进去，这样匀浆更充分。

    4.充分匀浆完成后离心取上清，离心机的转数选取2000-3000转每分，转数不宜超过5000.离心时间为15-30分钟。

新手实验注意事项：

新手以及那些没有固定协作供货商的顾客购买时往往有两种疑虑，首要便是价格，其次，便是质量，国内试剂盒相关于进口试剂盒来说价格自然会低许多。关于新手的视点来说价格低并不必定就会考虑购买，同时还在犹疑质量问题，由于没有用过新品牌的试剂盒心中总是在怀疑。利用交叉实验即可辨别是否造假：小鼠ELISA检测试剂盒说明书

1、取出购买的试剂盒A的包被板两条。

2、一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线。

3、另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线。

4、后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物。

我司在科研领域积累了丰富的经验，正是为了帮助中国的相关单位能够利用我司的经验与技术优势，为中国民众提供更安全，快捷的生命领域。

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