猴血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒

猴血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒

本试剂盒基于检测样本的特异性抗体包被酶标板，加入待测样本，样本与包被在酶标板上的特异性抗体结合，形成免疫复合物。清洗后加入酶标二抗，与免疫复合物结合，形成完整的三明治复合物。再加入底物溶液，底物在酶的作用下变色，颜色的深浅与样本的浓度呈正相关。最后加入终止液，使反应停止，在450nm波长下测量各孔的光密度值（OD值），通过标准曲线计算样本的浓度。

检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。

3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为8000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品：取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。 

4. 生物su化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物su化抗体稀释液稀释浓缩生物su化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

当日使用。

实验步骤

1. 样品收集与处理

（1）根据需要收集不同种类的样品，如血清、血浆、尿液等。

（2）对于血清和血浆样品，将采集的血液静置一段时间后，离心分离出血清或血浆。

（3）对于尿液样品，收集尿液后，可直接进行检测。

2. 样品稀释

根据试剂盒说明，对需要稀释的样品进行适当比例的稀释。

3. 加样

（1）按照试剂盒说明，分别将标准品、质控品和待测样品加入相应的孔中。

（2）每孔加入50μL，轻轻震荡混匀。

4. 封闭

根据试剂盒说明，加入适量的封闭液，覆盖板孔，并轻轻震荡混匀。封闭液一般为含有一定浓度的非特异性结合配体的溶液，可以降低非特异性结合的影响。

5. 洗涤

（1）将板孔洗涤液加入到每个孔中，轻轻震荡，然后倒掉洗涤液。重复洗涤3次，每次用洗涤液充分洗涤

（2）最后一次洗涤后，用纸巾轻轻吸干板孔表面的水分。

6. 酶标二抗加入及孵育

（1）根据试剂盒说明，将酶标二抗加入相应的孔中。

（2）孵育一定时间后，将板孔中的溶液倒掉。

7. 洗涤与显色

（1）重复步骤5的洗涤过程。

（2）加入显色剂，孵育一定时间后，将板孔中的溶液倒掉。

8. 终止反应与读数

（1）加入终止液，终止酶促反应。

（2）用酶标仪在450nm波长处读取各孔的光密度值（OD值）。

结果判断

 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

操作注意事项

1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3. 浓度为 0 的标准品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。

7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

猴血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒

免责声明

试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。

严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

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