人血管紧张素1-7(Ang1-7) ELISA 试剂盒

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被相关指标的抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的相关指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

操作步骤

1. 准备试剂
根据需要准备适量的ELISA试剂盒，包括抗体、酶标二抗、标准品等。
2. 制备标准品溶液
将标准品按照说明书上的要求进行稀释，一般采用倍比稀释法，制备成不同浓度的标准品溶液。
3. 加样
将待测样本和标准品溶液分别加入对应的微孔板中，按照说明书上的加样量加入相应的体积。
4. 孵育
将微孔板密封后置于37℃孵育一定时间，一般为1-2小时。
5. 洗涤
洗涤是ELISA实验中非常重要的一步，需要按照说明书上的要求进行正确的洗涤操作。洗涤的目的是去除未结合的物质，减少非特异性干扰。
6. 加酶标二抗
洗涤完成后，加入酶标二抗，按照说明书上的加样量加入相应的体积。然后再次将微孔板密封后置于37℃孵育一定时间。
7. 洗涤
同步骤5，进行正确的洗涤操作。
8. 加底物溶液
洗涤完成后，加入底物溶液，按照说明书上的加样量加入相应的体积。然后将其置于室温下避光孵育一定时间。
9. 终止反应
加入终止液，使反应停止。一般采用硫酸作为终止液。
10. 检测读数
在酶标仪上读取各孔的光密度值，记录数据。根据标准品溶液的浓度和光密度值绘制标准曲线，再根据待测样本的光密度值在标准曲线上求出浓度。

试剂盒组成

结果计算

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

人血管紧张素1-7(Ang1-7) ELISA 试剂盒