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土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性检测试剂盒说明书
货号:DM-W-B900
规格:100T/96S
试剂一:液体 42mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。用前加 100mL 蒸馏水充分溶解。试剂三:液体 2.5mL×1 瓶,4℃ 保存。
试剂四:粉剂×1 支,4℃避光保存。临用前加 576μL 无水乙醇(自备),24 μL 蒸馏水充分溶解。
(变褐色后不能再使用)
标准品:液体 1mL×1 支,0.5 μmol/mL 苯酚标准液,4℃保存。
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响,根据最适 pH 范围,通常分为酸性、中性和碱性三种类型。
酸性环境中,S-ACP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出 S-ACP 活性。
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。
一、粗酶液提取:
称取风干混匀土壤约 0.1g,加入 0.05mL 甲苯(自备),轻摇 15min;加 0.4 mL 试剂一并且摇匀后,置于 37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应 24h;到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。10000rpm 室温离心 10min,取上清液置于冰上待测。
a. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长到 660 nm,蒸馏水调零。
b. 空白管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 10 μL 蒸馏水,20 μL 试剂三,4 μL 试剂四,充分混匀, 显色后再加蒸馏水 166μL,混匀后室温静置 30 min,于 660 nm 测定吸光度,记为 A 空白管。
c. 标准管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 10 μL 标准液,20 μL 试剂三,4 μL 试剂四,充分混匀, 显色后再加蒸馏水 166μL,混匀后室温静置 30 min,于 660 nm 测定吸光度,记为 A 标准管。
d. 测定管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 10 μL 上清液,20 μL 试剂三,4 μL 试剂四,充分混匀, 显色后再加蒸馏水 166μL,混匀后室温静置 30 min,于 660 nm 测定吸光度,记为 A 测定管。
活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1 个酶活单位。
S-ACP(nmol/d/g)=[C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷W÷T
=725×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准液:0.5 μ mol/mL; V 总:催化体系总体积,1.45mL;W:土壤样品质量,g;T:催化反应时间,24 h=1 d。
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