冷冻细胞冻结程序:

冷冻细胞冻结程序: 

2.1. 根据细胞株数据单之基础培育基品种、血清品种和其它之成份和份额，制备培育基。绝大多数之细胞均无法当即习惯不同之基础培育基或不同之血清品种，若因试验需要，有必要有所不同时，必须以缓慢份额逐步改动培育基组成，断定细胞习惯后，方进行所需之试验。 2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 马血清)，对细胞而言差异极大，请必须根据细胞株资料单之血清品种培育之。

将培育基置于37 °C 水槽中回温，回温后喷以70 % 酒精并擦洗之，移入无菌操作台内。取出冷冻管，当即放入37 °C 水槽中快速冻结，水面高度不行挨近或高过冷冻管之盖沿，不然易发作污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化后，以70 % ethanol 擦洗冷冻管外部，移入无菌操作台内。

根据细胞品种和浓度，于无菌操作台内取10 ml 培育基加至T25 或T75 flask中。取出已冻结之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培育基，混合均匀，放入37 °C，5 % CO2 培育箱培育。