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抗体操作中还应注意如下问题:

更新时间:2024-05-06      浏览次数:64

抗体操作中还应注意如下问题:

1、热处理后应注意自然冷却。

2、热处理时要防止切片干燥。

3、应根据不同的抗体选择合适的抗原修复方法。

4、同一批抗原的检测所用温度和时间确保一致。

5、注意形态学结构的改变(一般经高温修复后胞浆会明显被破坏,对细胞核的影响较大,会出现核破裂与苏木到淡染等现象;而经酶水解的切片,其细胞浆破坏视消化时间长短而异,但核破坏较轻)。

6、如果在常用的缓冲液中无法实现抗原修复,或经修复后的抗原定位发生改变,可改用一些不常用的缓冲液,或加一些螯合剂,如EDTA等可改善某些抗原的修复。

用于免疫酶组织化学抗原修复的消化酶很多,所选酶的种类、使用的浓度、pH、消化时间及温度等均要视组织固定的不同,所检测抗原的性质与组织类型的不同而异,应通过预实验摸索确定。


使用酶消化的原则:

胰蛋白酶和蛋白酶K一般用于细胞内抗原,如Keratin,CEA与GFAP等。胃蛋白酶则主要用于细胞间质抗原的检测。抗体如fibronectin,Laminin与各型胶原等。

一般来说,消化时间和组织切片固定的长短呈正比。在用酶消化与热修复后均不能获得结果的前提下使用抗原修复与酶消化结合的方法,有时会取得较为满意的结果。

一般常用蛋白酶K和微波相结合,但应注意,无论何种性质的抗原检测均可能会在核内出现假阳性反应。因此必须要做对照。


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