关于 PBS 的冲洗

免疫组化的染色过程，除了前面的处理和加入的抗体外，都在 PBS 的冲冲洗洗中度过，PBS冲洗的正确与否，也是导致最后结果的关键。

1. 单独冲洗，防止交叉反应造成污染。临床上每天检测的病例很多，所用的抗体种类及项目也多，如果一抗孵育完后，将它们在一个缸内洗，这样就会造成交叉污染，影响最后的结果。正确的做法是单独地进行冲洗，冲洗的 PBS 为一次性，保证切片没有相互交叉污染的机会。

2. 温柔冲洗，防止切片的脱落。冲洗切片，取出切片，将 PBS 从上轻轻地冲洗，让 PBS 自上而下流下来，不要拿起切片将PBS 对准切片冲洗，这样由于冲出的 PBS 有一定的冲击力，很容易使切片周边引起松动，导致切片的脱落。

3. 冲洗的时间要足够，才能洗去结合的物质。冲洗切片有人提出用微振荡器振染，振下未结合的各种物，使之不产生背景，此种做法一是浪费时间，二是很容易导致切片的脱落。切片的冲洗据实践认为，用一小烧杯柔和地于切片上冲洗，就能冲洗去未结合的物质，无需附加其它条件，冲洗好于切片上再注入PBS，持续 2 分钟左右就足够了。

4. PBS 的 PH 和离子强度的使用和要求。指出：中性及弱硷性条件（PH7－8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解。［］免疫组化P56 我们目前常用的 PBS 的 PH 在 7.4-7.6 浓度是 0.01M，根据本室十几年来的使用情况，认为该溶液价格便宜配制方面，使用效果好。

5. 常用试剂的配制和使用。在免疫组织化学的染色过程中，用得最多的试剂就是缓冲液，因为切片在整个染色中，抗体的加，换，切片的冲洗，DAB 的都离不开缓冲液。可见缓冲液在整个染色中都起至关键的作用，缓冲液的过酸或偏碱，都将影响染色的结果。