免疫组化技巧

免疫组化技巧

1、做前防护：二甲苯有毒易挥发，二甲苯可以诱导白血病。必须在通风厨中脱蜡和透明。

2、脱蜡前将石蜡切片放入 60 度烘箱中烘烤 2 个小时，有助于脱蜡，并可以防脱片。

3、提高温度有助于二甲苯脱蜡，冬天时，可将二甲苯先放入 37°孵箱中保温，再进行脱蜡，提高脱蜡效果。

4、脱蜡过程，最后一步二甲苯应尽量保持新鲜二甲苯，同时将上次的二甲苯依次往前一个二甲苯中更换，因为最前的二甲苯是石蜡残留最多，越往后的二甲苯中石蜡越少。

5、水化过程，最后的一个乙醇也应该勤换，同理，最后一个乙醇中的二甲苯最少。6、消除内源性过氧化物酶建议用 3% H2O2（甲醇 90ml+H2O2 10ml）（PS：H2O2 原浓度是 30%的，变成 3%应 10 倍稀释）, 甲醇具有固定作用，有助于保护组织。

7、抗原修复，0.01M 柠檬酸钠缓冲液（PH 6.0），建议使用高压锅来抗原修复，高压锅温度较为稳定，微波炉抗原修复火候控制不稳定，导致修复液经常沸腾时易引起脱片。

8、封闭前，建议使用免疫组化笔将组织部分画圈，防止抗体流出片子。很好用的，不过500个大洋哦。

9、DAB 显色程度把握，在目的组织处，显现出黄色或者棕色颗粒状时，而组织边缘尚还未显色时，终止显色。简而言之，在边缘效应出现前，而目的蛋白显色出来时终止最佳。

10、封片前，脱水步骤即为水化的反方向操作，注意事项同理。

11、免疫组化拍照时，高倍镜下视野模糊，无论如何调节显微镜焦距都无法清晰时，考虑脱水没有脱干净及切片未二甲苯透明。

12、免疫组化结果好坏判断：目的蛋白成黄色棕色细沙或细颗粒状，蛋白显色定位正确，核还是浆。背景无色，细胞核蓝色。