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免疫组化技巧

更新时间:2024-03-26      浏览次数:105

免疫组化技巧

1、做前防护:二甲苯有毒易挥发,二甲苯可以诱导白血病。必须在通风厨中脱蜡和透明。

2、脱蜡前将石蜡切片放入 60 度烘箱中烘烤 2 个小时,有助于脱蜡,并可以防脱片。

3、提高温度有助于二甲苯脱蜡,冬天时,可将二甲苯先放入 37°孵箱中保温,再进行脱蜡,提高脱蜡效果。

4、脱蜡过程,最后一步二甲苯应尽量保持新鲜二甲苯,同时将上次的二甲苯依次往前一个二甲苯中更换,因为最前的二甲苯是石蜡残留最多,越往后的二甲苯中石蜡越少。

5、水化过程,最后的一个乙醇也应该勤换,同理,最后一个乙醇中的二甲苯最少。6、消除内源性过氧化物酶建议用 3% H2O2(甲醇 90ml+H2O2 10ml)(PS:H2O2 原浓度是 30%的,变成 3%应 10 倍稀释), 甲醇具有固定作用,有助于保护组织。

7、抗原修复,0.01M 柠檬酸钠缓冲液(PH 6.0),建议使用高压锅来抗原修复,高压锅温度较为稳定,微波炉抗原修复火候控制不稳定,导致修复液经常沸腾时易引起脱片。

8、封闭前,建议使用免疫组化笔将组织部分画圈,防止抗体流出片子。很好用的,不过500个大洋哦。

9、DAB 显色程度把握,在目的组织处,显现出黄色或者棕色颗粒状时,而组织边缘尚还未显色时,终止显色。简而言之,在边缘效应出现前,而目的蛋白显色出来时终止最佳。

10、封片前,脱水步骤即为水化的反方向操作,注意事项同理。

11、免疫组化拍照时,高倍镜下视野模糊,无论如何调节显微镜焦距都无法清晰时,考虑脱水没有脱干净及切片未二甲苯透明。

12、免疫组化结果好坏判断:目的蛋白成黄色棕色细沙或细颗粒状,蛋白显色定位正确,核还是浆。背景无色,细胞核蓝色。



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